（一）“一種利用qPCR精確定量不同GC含量的二代測序文庫的方法及試劑盒”
2019年08月13日，全式金獲此項專利授權，專利號:ZL201610864592.0。
本發(fā)明公開了一種利用qPCR精確定量不同GC含量的二代測序文庫的方法及試劑盒。首先提供了利用qPCR精確定量不同GC含量的二代測序文庫的試劑盒，包含：多個不同GC含量的標準品，文庫稀釋液，qPCR預混液，引物，ddH2O。還提供了利用上述試劑盒進行qPCR精確定量不同GC含量的二代測序文庫的方法。本發(fā)明試劑盒和方法定量精確、使用方便、適用范圍廣、選擇性強、靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性好，為高質量高效率的測序提供了保證。
我公司應用此專利技術自主研發(fā)的定量試劑盒“TransNGS? Library Quantification Kit for Illumina （KQ101）” 特點：
· 線性標準品，定量更精確。
· 選擇性強、定量更精確，精心設計多種不同GC 含量的標準品。
· 特異性強，只擴增雙端接頭完整的文庫分子。
· 操作簡便，直接使用預先稀釋好的標準品，包含絕對定量所有必需組分。
· 擴增效率與靈敏度高，特別優(yōu)化的qPCR 體系與程序。
· 適用范圍廣，可擴增AT/GC 含量高的模板。
· 兼容性好，兼容所有主流qPCR 儀器。
· 穩(wěn)定性好，重復性好。
（1）產品穩(wěn)定性
分別使用不同批次產品進行qPCR 檢測，結果顯示，4 個批次的標準品(S6-S1) 的Ct 值均無明顯差異，繪制的標準曲線方程非常穩(wěn)定，標準品批次間穩(wěn)定性非常好。
（2）與主流產品的對比
分別使用TransGen、K 公司、N 公司及V 公司產品對6 個不同物種的文庫進行定量，結果顯示，TransGen 與K 公司對6 個文庫定量結果無明顯差異，而其它兩種產品結果明顯偏高或偏低，TransGen 產品定量結果與金標準K 公司產品定量結果一致。
（3）產品極限數據
分別使用TransGen 及K 公司產品對6 個差異明顯的文庫進行定量，結果顯示，TransGen 對不同種屬文庫、不同GC含量、不同長度、不同濃度的文庫都可以精確檢測，與金標準K 公司一致，這說明產品適用范圍廣。文庫檢測合格后，按照文庫定量結果將相同量的不同文庫Pooling 至同一條Lane 后進行Illumina HiSeq 測序，數據分析顯示，NGS 能獲得預期量的clean reads, 并且根據TransGen 與K 公司定量結果所獲得的數據量無明顯差異。
分別使用TransGen 與K 公司文庫定量產品對5 種同一濃度的不同GC 含量（25%、37.5%、50%、62.5%、75%）的標準品進行qPCR 檢測，結果顯示，不同GC 含量的標準品的Ct 值差異小，都可很好地擴增。表明TransGen 產品適用范圍廣，與金標準K 公司產品相當。
（4）產品特色與優(yōu)勢
· 精心設計5 種不同GC 含量的線性標準品，選擇性更強，定量更精確。
分別使用5 種不同GC 含量（25%、37.5%、50%、62.5%、75%）的標準品繪制標準曲線，定量天藍色鏈霉菌（左，72%GC）與擬南芥（右，36% GC）這兩個DNA 文庫的濃度，結果顯示，不同GC 含量標準品定量結果差異明顯。如果以50% GC Standards 作為標準品，其定量結果明顯會相對偏小(p 值都小于0.001，n=4)。因此，天藍色鏈霉菌的DNA文庫應該選擇75% GC Standards 而擬南芥則選擇37.5% GC Standards 分別作為其最佳標準品，文庫定量結果會更加精確，確保獲取更高質量的測序結果。
（二）“一種適用于高效反轉錄反應的反轉錄引物組合”
2019年08月13日，全式金獲此項專利授權，專利號：ZL201710031139.6。
本發(fā)明公開了一種適用于高效反轉錄反應的反轉錄引物組合，所述反轉錄引物組合由帶有oligo(dT)結構的引物和半隨機引物組成，還公開了所述反轉錄引物在反轉錄反應中的應用。本發(fā)明反轉錄引物組合在保留了錨定引物優(yōu)勢的同時，避免了普通隨機引物所引起的堿基錯配和非隨機配對，消除傳統(tǒng)反轉錄引物對于mRNA模板5’端、3’端的合成效率偏好性，使mRNA模板各位點能夠均勻、無差錯地合成到相對應的cDNA中，從而顯著提升反轉錄效率與數據均一性、穩(wěn)定性。
除一步法外，Trans RT系列產品均配有Anchored Oligo（dT），結合位點鉚釘，特異性高，跨越Poly（A）+結構，保證cDNA合成效率和成功率。
在此我們要重點介紹一下我司的反轉錄All-in-One系列產品:
1)TransScript? All-in-One First-Strand cDNA Synthesis SuperMix for PCR（AT321）；
2)TransScript? II All-in-One First-Strand cDNA Synthesis SuperMix for PCR（AH321）；
這兩款產品含有反轉錄反應所需的全部試劑，只需加入模板RNA和RNase-free water即可反應。最大程度地簡化了操作步驟, 降低了污染幾率；反轉錄反應僅需30min；最佳Anchored Oligo(dT) Primer和Random Primer(N9)配比，長鏈cDNA合成效率高；兩款產品反轉錄產物適用于PCR（也可用于qPCR）。
·TransScript? All-in-One First-Strand cDNA Synthesis SuperMix for PCR合成長度，TransScript≤12kb；
·TransScript? II All-in-One First-Strand cDNA Synthesis SuperMix for PCR合成長度， TransScriptⅡ≤15kb；高熱穩(wěn)定性：反應溫度42℃-55℃，最佳反應溫度為50℃；適用于高拷貝、低拷貝基因檢測；突出高GC含量或具有復雜二級結構的RNA模板。
3)TransScript? All-in-One First-Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR（One-Step gDNA Removal）（AT341）；
4)TransScript? II All-in-One First-Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR（One-Step gDNA Removal）（AH341）。
這兩款產品含有反轉錄反應所需的全部試劑，只需加入gDNA Remover，模板RNA和RNase free water即可反應。最大程度地簡化了操作步驟, 降低了污染幾率；整個反轉錄反應僅需15 min；由最佳的Anchored Oligo(dT) Primer和Random Primer(N9)配比，及優(yōu)化的SuperMix組成，確保對不同濃度的RNA有相同的反轉錄效率，短鏈cDNA合成效率高；該Mix中含有gDNA Remover組分，在同一反應管中，同時完成反轉錄與基因組DNA的去除，降低污染幾率，保證后續(xù)qPCR實驗結果更加理想。
兩項發(fā)明專利的同時授權既是我公司的榮譽，也是對我公司技術水平的肯定，全式金將繼續(xù)堅持自主研發(fā)、創(chuàng)新的發(fā)展模式，為廣大客戶朋友們提供高性價比的產品，助力生命科學的研究和發(fā)展。
